Annexin V-APC/7-AAD细胞凋亡检测试剂盒
产品名称: Annexin V-APC/7-AAD细胞凋亡检测试剂盒
英文名称: Annexin V-APC/7-AAD Apoptosis Detection Kit
产品编号: 40309ES20
产品价格: 0
产品产地: Yeasen
品牌商标: Yeasen
更新时间: 2024-12-10T13:22:33
使用范围: null
- 联系人 : 李自转
- 地址 : 上海市浦东新区天雄路166弄一号楼三层南单元
- 邮编 : 200030
- 所在区域 : 上海
- 电话 : 139****5640 点击查看
- 传真 : 点击查看
- 邮箱 : lizizhuan@yeasen.com
- 二维码 : 点击查看
Annexin V-APC/7-AAD细胞凋亡检测试剂盒
Annexin V-APC/7-AAD Apoptosis Detection Kit
产品信息
产品描述
Annexin V-APC/7-AAD细胞凋亡检测试剂盒是用荧光素APC标记的Annexin V作为探针,来检测细胞早期凋亡的发生,可用流式细胞仪或其他荧光检测设备进行检测。
其检测原理为:在正常的活细胞中,磷脂酰丝氨酸(phosphotidylserine,PS)位于细胞膜的内侧,但在早期凋亡的细胞中,PS从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面,暴露在细胞外环境中。Annexin-V(膜联蛋白-V)是一种分子量为35-36KD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,能与PS高亲和力结合。可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。
另外,本试剂盒中提供的7-AAD可用来区分存活的早期细胞和坏死或晚期凋亡细胞。7-AAD是一种核酸染料,同PI有着相似的荧光特性,但其发射光谱较PI窄,对其他检测通道的干扰更小,在多色荧光分析中是PI的最佳替代品,可与Annexin V联合使用。该染料不能透过正常细胞或早期凋亡细胞的完整的细胞膜,但可穿透晚期凋亡细胞或者坏死细胞并与其内的DNA结合。因此将Annexin V-APC与7-AAD联合使用时,7-AAD则被排除在活细胞(Annexin V-/7-AAD-)和早期凋亡细胞(Annexin V+/7-AAD-)之外,而晚期凋亡细胞和坏死细胞同时被Annexin V-APC和7-AAD结合染色呈现双阳性(Annexin V+/7-AAD+)。
产品组分
*来源于大肠杆菌(E.coli),分子量为35.8 KDa,纯度>98%(SDS-PAGE&HPLC)
运输和保存方法
冰袋运输。本试剂盒中所有组分均在4℃保存,勿冰冻。Annexin V-APC、7-AAD需避光保存。一年有效。
注意事项
1) 试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
2) 7-AAD为潜在致癌物,操作时请采取防护措施,穿防护服、戴手套等;
3) 推荐使用悬浮培养细胞。若是贴壁细胞,建议使用不含EDTA的胰酶消化,如果消化不当,可能引起假阳性;若用细胞刮子则会造成细胞黏连成团而影响检测。可将胰酶消化后的细胞保存于含2% BSA的PBS中,防止进一步的损伤。
4) 本试剂盒适用于检测活细胞,流式细胞仪检测时,细胞数量不应低于1×105,不推荐用于组织样本检测。
5) 请勿固定样品,细胞固定后可能导致荧光的猝灭;
6) 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同,因而流式检测的荧光补偿也不同,因此建议每次检测均需使用未经凋亡细胞处理的细胞作为阴性对照,并进行荧光补偿的调节。
7) 如果样品来源于血液,请务必除去血液中的血小板。因为血小板含有PS,能与Annexin V结合,从而干扰实验结果。可以使用含有EDTA的缓冲剂并低速离心(200×g)洗去血小板,然后用Annexin V结合缓冲液清洗细胞,以避免残留的EDTA会螯合Ca2+。
8) Annexin V-APC和7-AAD是光敏物质,在操作时请注意避光。
9) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法
1.1 样品染色
贴壁细胞:用不含EDTA的胰酶消化后,300g,4℃离心5 min收集细胞。胰酶消化时间不宜过长,以防引起假阳性。
2. 用4℃预冷的PBS洗涤细胞2次,每次均需300g,4℃离心5 min。收集1-5×105细胞。
3. 加入500μl 的Binding buffer 悬浮细胞;
4. 加入5μl Annexin V-APC混匀后,加入5μl 7-AAD染液,混匀;
5. 室温、避光反应5-15min;样品在1小时内检测。
1.2 观察检测
A、流式细胞仪分析
1) 用流式细胞仪检测,Ex/Em=633/660nm 检测Annexin V-APC红色荧光建议使用FL4通道;Ex/Em=546/647nm检测7-AAD红色荧光建议使用FL3通道。
2) 荧光补偿调节:使用未经凋亡诱导处理的正常细胞,作为对照进行荧光补偿调节去除光谱重叠和设定十字门的位置。
B、荧光显微镜观察
1)滴一滴上述染色后的细胞悬液于载玻片上,并用盖玻片盖上细胞;
2)对于贴壁细胞来说,也可直接用盖玻片来培养细胞并诱导细胞凋亡;
a 将细胞于盖玻片上生长,用适当的凋亡诱导剂诱导细胞凋亡,并设立阴性对照组;
b 用PBS洗涤细胞两次;
c 在500μl的Bingding buffer 中加入5μl Annexin V-APC,5μl 7-AAD染液混匀;
d 将上述溶液滴加于盖玻片表面,使长有细胞的盖玻片表面均匀覆盖;
e 室温避光孵育5min。
3)将盖玻片倒置于载玻片上,在荧光显微镜下用双色滤光片观察。于激发波长633nm,最大发射波长660nm观察Annexin V-APC 红色荧光信号;激发波长546nm,发射波长647nm,观察7-AAD红色荧光信号。
相关产品