JC-10 线粒体膜电位荧光探针
产品名称: JC-10 线粒体膜电位荧光探针
英文名称: JC-10 线粒体膜电位荧光探针
产品编号: 40707ES03
产品价格: 0
产品产地: 翌圣生物
品牌商标: Yeasen
更新时间: 2024-12-10T13:16:28
使用范围: null
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产品信息
产品描述
线粒体膜电位荧光探针JC-10是JC-1的升级产品,同样可用于检测线粒体膜电位的变化。因JC-1虽然在许多实验中被广泛应用,但是其水溶性很差,即使在1 μM浓度的条件下,JC-1也会在水的缓冲液中析出。而JC-10具有更好的水溶性,可以在某些需要高浓度染料的实验中替代JC-1。
正常细胞内,JC-10选择性聚集在线粒体基质中形成可逆的红色荧光聚合物(Ex=540 nm, Em=590 nm);不健康的线粒体由于膜电位的下降或丧失,JC-10由多聚体转变为单体形式存在于胞浆中,产生绿色荧光(Ex=490 nm, Em=525nm)。JC-10不仅可用于定性检测,因颜色的变化可以非常直接的反映出线粒体膜电位的变化。也可以用于定量检测,因线粒体的去极化程度可以通过红/绿荧光强度的比例来衡量。这两种颜色的变化可以用流式细胞仪上的标准滤光器检测到,绿色荧光可用FL1通道分析,红色荧光可用FL2通道分析。除了用于流式细胞术,也可以用于荧光成像和荧光酶标板检测平台。
在一些细胞系中JC-10有着比JC-1更好的表现。不过,JC-10的性能表现极具细胞依赖性特征。
产品性质
运输与保存方法
冰袋(wet ice)运输。粉末-20℃干燥避光保存,至少一年有效。储存液分装成单次使用量,-20℃干燥避光保存,避免反复冻融,约一年有效。
使用方法
1工作液配制:
1)JC-10粉末(5 mg):直接加2.5 ml DMSO到粉末内,室温颠倒混匀使其充分溶解,即得到2 mg/ml(约3 mM)的储存液。溶液分装成小量储存于-20℃,避光干燥,避免反复冻融。
2)JC-10储存液(1mg in DMSO):本品是JC-10的DMSO储存液,浓度为2 mg/ml(约3 mM)。使用者需要根据单次用量来分装,-20℃避光干燥,避免反复冻融。
3)工作液配制(现配现用):将冻存的储存液置于室温充分融化,之后用HHBS(1×Hanks with 20 mM Hepes buffer, pH 7.0)或其他缓冲液(pH 7-8,含0.02% Pluronic® F-127)配制成10-30 μM 1×工作液。涡旋混匀。
注:对于某些细胞,在pH 8情况下可能会阻止JC-10渗透入细胞。
2 JC-1染色步骤(荧光酶标仪)
1)细胞准备
A贴壁细胞:细胞培养过夜使其密度达到2×104~8×104 cells/well/90μl(96孔板)或者5×103~2×104 cells/well/20μl (384孔板)。
B悬浮细胞:离心后重新将细胞悬浮在培养液中1×105~2×105 cells/well/90μl(多聚赖氨酸包被的96孔板)或者2.5×103~5×104 cells/well/20μl (多聚赖氨酸包被的384孔板)。 实验前800 rpm离心2分钟。注意:不同的细胞系需要根据具体情况优化凋亡实验用的最佳细胞密度。
2)用实验药物(10 μl 10×化合物)处理细胞一段时间以诱导细胞凋亡(例如,用camptothecin处理Jurkat细胞4-6 h)。空白对照(只有培养基不含细胞)中加入相同量的药物。 注意:药物处理前没有必要清洗细胞。但是,如果药物对血清敏感,可在加入药物前吸掉培养基和血清因子。然后加入等量体积的HBSS溶液到孔内。或者细胞直接培养在无血清培养基内。
3)加入100 μl/孔(96孔板)或25 μl/孔(384孔板)JC-10工作液。
4)37℃,5% CO2孵育15-60 min。具体孵育时间取决于细胞类型和细胞浓度。每次实验建议优化体系。
5)直接进行荧光变化检测,记录Ex/Em = 500/525 nm(FITC通道)和540/595 nm(TRITC通道)的荧光值,然后计算红色荧光信号与绿色荧光信号的比值,用来判断细胞健康程度。
(可选)或者,吸除JC-10工作液,加入100μl /孔(96孔板)或25μl/孔(384孔板)HHBS,再进行后续的荧光酶标仪检测。
3 JC-1染色步骤(荧光显微镜或流式细胞仪)
1)养细胞过夜使其在药物处理以诱导凋亡时的密度为:5×105~1×106 cells/ml。选择实验药物处理细胞一段时间以诱导细胞凋亡(例如,用camptothecin