JC-1线粒体膜电位检测试剂盒
产品名称: JC-1线粒体膜电位检测试剂盒
英文名称: JC-1 Mitochondrial Membrane Potential Assay Kit
产品编号: 40706ES60
产品价格: 0
产品产地: 翌圣生物
品牌商标: Yeasen
更新时间: 2024-12-10T11:21:51
使用范围: null
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JC-1 Mitochondrial Membrane Potential Assay Kit JC-1线粒体膜电位检测试剂盒
40706ES60
100 tests(6孔板)
-20℃避光保存
产品描述
JC-1线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1 Mitochondrial Membrane Potential Assay Kit)是一种以JC-1 为荧光探针,快速灵敏地检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位变化的试剂盒,可以用于早期的细胞凋亡检测,也是用来检测细胞早期凋亡的常用方法。
JC-1 是一种广泛用于检测线粒体膜电位△Ψm 的理想荧光探针,JC-1染料以电势依赖性的方式积聚在线粒体内。正常线粒体内,JC-1聚集在线粒体基质中形成聚合物,聚合物发出强烈的红色荧光(Ex=585 nm, Em=590 nm);不健康的线粒体由于膜电位的下降或丧失,JC-1只能以单体的形式存在于胞浆中,产生绿色荧光(Ex=514 nm, Em=529 nm)。JC-1不仅可用于定性检测,因颜色的变化可以非常直接的反映出线粒体膜电位的变化。也可以用于定量检测,因线粒体的去极化程度可以通过红/绿荧光强度的比例来衡量。观察时,只需使用常规的观察红色荧光和绿色荧光的设置即可。
线粒体膜电势的破坏是细胞凋亡早期发生的一个标志性事件。细胞受到凋亡诱导后线粒体膜电位的变化使得膜的通透性发生改变。膜通透性的增加,使得线粒体蛋白包括细胞色素C、Smac/DIABLO、HtrA2/OMI、核酸内切酶G(EndoG)、凋亡诱导因子(AIF)等从线粒体基质释放到细胞浆。细胞色素C的释放伴随膜电位的完全丧失,进而引发细胞凋亡酶的级联效应。
本试剂盒提供了CCCP 作为诱导线粒体膜电位下降的阳性对照。对于六孔板中的样品,本试剂盒共可以检测100 个样品;对于12 孔中的样品,本试剂盒共可以检测200 个样品。
试剂盒组分
编号
组分
规格
保存方法
40706-A
JC-1(200×)
5× 100 μL/管
-20℃避光
40706-B
JC-1染色缓冲液(5×)
80 mL
40706-C
CCCP(50 mM)
20 μL
-20℃避光
40706-D
超纯水
90 mL
4℃保存
运输与保存方法
冰袋(wet ice)运输。
-20℃避光保存,尽量避免反复冻融,有效期一年。超纯水和JC-1 染色缓冲液(5×)也可4℃保存。
使用说明
1. JC-1 染色工作液的配制
六孔板每孔所需 JC-1 染色工作液的量为1 mL,其他培养器皿的JC-1 染色工作液的用量以此类推;对于细胞悬液每50~100 万细胞需0.5 mL JC-1 染色工作液。取适量JC-1(200×),按照每50μL JC-1(200×)加入8 mL 超纯水的比例稀释JC-1。剧烈震荡充分溶解并混匀JC-1。然后再加入2 mL JC-1 染色缓冲液(5×),混匀后即为JC-1 染色工作液。
2. 阳性对照的设置
把试剂盒中提供的CCCP(50mM)推荐按照1∶1000 的比例加入到细胞培养液中,稀释至50 μM,处理细胞20分钟。随后按照下述方法装载JC-1,进行线粒体膜电位的检测。对于大多数细胞,通常50μM CCCP处理20 分钟后线粒体的膜电位会完全丧失,JC-1 染色后观察应呈绿色荧光;而正常的细胞经JC-1 染色后应显示红色荧光。对于特定的细胞,CCCP 的作用浓度和作用时间可能有所不同,需自行参考相关文献资料决定或优化体系摸索最优条件。
3. 对于悬浮细胞
1) 取10~60 万细胞,重悬于0.5 mL 细胞培养液中,细胞培养液中可以含血清和酚红。
2) 加入0.5 mL JC-1 染色工作液,颠倒数次混匀。细胞培养箱中37℃孵育20 分钟。
3) 在孵育期间,按照每1 mL JC-1 染色缓冲液(5×)加入4 mL 蒸馏水的比例,配制适量的JC-1 染色缓冲液(1×),并放置于冰浴。