产品信息

    

        

            

            
产品名称          
            
            

            
产品编号
            
            

            
规格
            
            

            
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价格（元）
            
        
        

            

            
Hoechst 33342/PI Double Stain Kit Hoechst 33342/PI 双染试剂盒 
            
            

            
40744ES60
            
            

            
100T
            
            

            
-20 oC～+4℃
            
            

            
219.00
            
        
    

产品描述
Hoechst 33342/PI 双染试剂盒（Hoechst 33342/PI Double Stain Kit）采用Hoechst 33342和碘化丙啶（PI）双染的方法以区分凋亡细胞和坏死细胞的试剂盒。其检测原理是：细胞核荧光染料Hoechst 33342可以穿透细胞膜，嵌入双链DNA后释放蓝色荧光。对于正常细胞，其可少许进入细胞膜使其染上低蓝色。而凋亡细胞由于细胞膜通透性增强，从而使得进入凋亡细胞内的Hoechst 33342明显多于正常细胞，荧光强度比正常细胞要高。另外，细胞发生凋亡时染色质会固缩，从而使得染料能更有效和聚集的结合于DNA，并且凋亡细胞膜上的p-糖蛋白泵功能受损而不能有效的将Hoechst 33342排除到细胞外使其在细胞内的积累增加，这些特征都使得凋亡细胞经染色后荧光会比正常细胞明显增强。但细胞核荧光染料PI不能穿透细胞膜完整的正常细胞或凋亡细胞，即活细胞对PI染料拒染。而对于坏死细胞，其细胞膜的完整性在早期即已丧失，可被PI染色。
经上述两种染料双染后，使用流式细胞仪或荧光显微镜检测时，正常细胞为弱红色荧光＋弱蓝色荧光，凋亡细胞为弱红色荧光＋强蓝色荧光，坏死细胞为强红色荧光＋弱蓝色荧光。
本试剂盒染色快速方便，可用一步法或者两步法进行染色。使用流式细胞仪检测时，无需稀释等配制过程，也无需再准备其它任何溶液。本试剂盒足够检测100个样品，每个样品的细胞数量可达105-106个。
产品组分

    

        

            

            
组分编号
            
            

            
组分名称
            
            

            
40744ES60（100T）
            
            

            
 保存方法
            
        
        

            

            
40744-A
            
            

            
Hoechst 33342 染色液 Hoechst 33342 Stain Solution
            
            

            
500 μl
            
            

            
4℃或-20℃避光保存
            
        
        

            

            
40744-B
            
            

            
PI 染色液 PI Stain Solution
            
            

            
500 μl
            
            

            
4℃或-20℃避光保存
            
        
        

            

            
40744-C
            
            

            
细胞染色缓冲液 Cell Stain Buffer
            
            

            
100 ml
            
            

            
4℃或-20℃保存
            
        
    

运输与保存方法
冰袋（wet ice）运输。
4℃保存，有效期6个月。-20℃保存，有效期12个月，建议分装避免反复冻融。
注意事项
1)         Hoechst 33342、PI对人体有害，请注意适当防护；
2)         Hoechst 33342、PI需避光，整个实验过程尽量避光操作；
3)         荧光染料均存在淬灭情况，建议染色后需尽快检测；
4)         Hoechst 33342 与细胞孵育时间不宜过长，一般控制在20min以内。太长容易引起该染料的发射光谱由蓝光向红光迁移，导致红色荧光和蓝色荧光比例改变。
5)         如果用于组织样品检测，则必须把组织消化制备成单细胞悬浮液后才可以进行检测。
6)         为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
操作步骤
1.        样品准备

贴壁细胞：小心吸除培养液至一个无菌离心管内备用。胰酶消化细胞，加入上述培养液，吹打下所有贴壁细胞，并轻轻吹散细胞，收集至离心管内。4℃，1000g 离心3-5min，使细胞沉淀至管底。小心吸除上清，可留约50μl培养液，以免吸到细胞。加入约1ml预冷PBS（Yeasen, 货号：60145ES76）， 重悬细胞，并转移至1.5ml无菌离心管。4℃，1000g 离心3-5min，使细胞沉淀至管底。小心吸除上清，可留约50μl PBS，以免吸到细胞。轻弹离心管底适当分散细胞，避细胞成团。
悬浮细胞：4℃，1000g 离心3-5min，使细胞沉淀至管底。小心吸除上清，可留约50μl培养液，尽量避免吸到细胞。加入约1ml预冷PBS， 重悬细胞，并转移至1.5ml无菌离心管。4℃，1000g 离心3-5min，使细胞沉淀到管底。小心吸除上清，可留约50μl PBS，以免吸到细胞。轻弹离心管底适当分散细胞，避免细胞成团。
2.        重悬细胞：取上述收集好的105-106个细胞，加入0.8-1ml细胞染色缓冲液重悬细胞。
3.        细胞染色：
3.1 一步法染色
1） 加入5μl Hoechst 33342染色液。

2）加入5μl PI染色液。

3） 轻轻混匀，冰浴或4℃孵育20-30min。【注：尽快进行后续荧光检测】
3.2 两步法染色：
1）加入5μl Hoechst 33342染色液，置于37℃孵育5-15min；
  
2）置于冰水浴中冷却后，4℃1000g离心3-5min，吸除上层染色液；
3）加入0.8-1ml细胞染色缓冲液重悬细胞沉淀；
4）加入5μl PI染色液，置于冰浴或4℃，孵育5-15min。【注：尽快进行后续荧光检测】
4. 检测与分析
4.1  流式细胞仪检测：Hoechst 33342用氪离子激光激发紫外光，与 DNA结合后其最大激发波长为352nm，发射波长为400- 500nm（最大激发波长461nm），产生蓝色荧光；PI用氩离子激光激发荧光，与DNA结合后可用激发波长488nm（最大激发波长535nm），发射波长大于575nm（最大激发波长617nm），产生红色荧光，分析蓝色荧光对红色荧光的散点图或地形图。
结果判断：在蓝色荧光对红色荧光的散点图上，可将细胞分为三个群：TUNEology 波长可调检测卡盒-->