酶切点位
5-A↓CTAGT-3
3-TGATC↑A-5

产品信息
 
产品名称
产品编号
规格
价格（元）
促销价（元）
FuniCut™ SpeI
15028ES50
50 T
165.00
157.00
 
产品描述
 
FuniCut™系列内切酶是通过基因工程重组技术，可在5~15 min内精确完成DNA切割的快速限制性内切酶，适用于快速切割质粒DNA、PCR产物、基因组DNA等。FuniCut™系列快速内切酶共用一种酶切缓冲液，从而简化了酶切反应体系，另外，有良好的酶活冗余度，可轻松处理底物过量或困难模板的酶切。
 
产品组分
 
组分编号
组分名称
产品规格
15028-A
FuniCut™ SpeI
50 μL
15028-B
10×FuniCut™ Buffer
1 mL
15028-C
10×FuniCut™ Color Buffer
1 mL
 
运输与保存方法
 
冰袋运输。-20°C保存，有效期2年。
 
识别位置
 
5-A↓CTAGT-3
3-TGATC↑A-5
 
推荐反应条件
 
1× FuniCut™ 缓冲液；
最适37°C孵育。
 
失活条件
 
80°C孵育20 min。
 
注意事项
 
1）3 h孵育未表现星号活性，延时酶切可能出现星号活性；
2）受EcoKI甲基化影响，序列可能重叠，剪切可能受影响；
3）受EcoBI甲基化影响，序列可能重叠，剪切可能受影响；
4）为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作；
5）本产品仅作科研用途！

质量控制
 
1. 功能活性检测：最适反应温度下，在20 μL反应体系中，1 μL酶能够在15 min内完全消化1 μg pUC19-SpeI DNA。
2. 超长时间孵育检测：最适反应温度下，将1 μL酶与1 μg pUC19-SpeI DNA共孵育3 h，未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解，但延长孵育时间可能出现星号活性。
3. 酶切-连接-再酶切检测：最适反应温度下，使用1 μL酶消化底物，回收酶切产物，在22°C下使用适量T4 DNA连接酶可以将酶切产物重新连接，将连接产物再次回收后，使用相同的内切酶可以重新切开连接产物。
4. 非特异性内切酶活性检测：最适反应温度下，将1 μL酶与1 μg超螺旋质粒DNA共同孵育4 h后，使用琼脂糖凝胶电泳检测，质粒DNA仍然处于超螺旋状态。
5. 蓝白斑检测：将含有单一lacZα基因的载体以1 μL酶消化，重新连接后转化入大肠杆菌感受态细胞，涂布在含有对应抗生素、IPTG和X-gal的LB培养基平板上。连接正确的产物会生长出蓝色菌落，而连接错误（即DNA末端切口不完整）的产物将得到白色菌落。对于FuniCut™系列限制酶而言，白色菌落比例应小于1%。
 
使用方法
 
1. DNA快速酶切流程
1）按如下建议的加样顺序配制体系反应液（冰上操作）：
组分
质粒DNA
PCR产物
基因组DNA
ddH2O
15 μL
16 μL
30 μL
10×FuniCut™ Buffer或10×FuniCut™ Color Buffer
2 μL
3 μL*
5 μL
底物DNA
2 μL（~1 μg）
10 μL (~0.2 μg)
10 μL (5 μg)
FuniCut™ SpeI
1 μL
1 μL
5 μL
Total
20 μL
30 μL
50 μL
*本体系指已纯化后的PCR产物。未纯化的PCR产物具备一定的离子强度，10×FuniCut TM Buffer加入量可适当减少至2 μL。若下一步进行克隆等实验，酶切前需纯化PCR产物。
2）轻柔吸打或轻弹管壁以混匀（切勿涡旋），然后瞬时离心以收集挂壁液滴。
3）37°C孵育15 min（质粒），或15~30 min（PCR 产物），或30~60 min（基因组 DNA）。
4）80°C孵育20 min即可使酶失活，停止反应（可选）。
2. 双酶切或多酶切
1）每种内切酶的用量为1 μL，并根据需要适当扩大反应体系。
2）所有内切酶的体积总和不得超过总反应体系的1/10。
3）如果选用的几种内切酶的最适反应温度不同，应先以最适温度低的酶开始酶切，再添加最适温度较高的酶，以较高的温度进行孵育。
 
3.质粒的扩大反应体系
组分
体积（20 μL）
体积（20 μL）
体积（50 μL）
DNA
1 μg
2 μg
5 μg
FuniCut™ SpeI
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