Annexin V- Alexa Fluor 488/PI 细胞凋亡检测试剂盒 40305ES
产品名称: Annexin V- Alexa Fluor 488/PI 细胞凋亡检测试剂盒 40305ES
英文名称: Annexin V- Alexa Fluor 488/PI Apoptosis Detection Kit
产品编号: 40305ES20
产品价格: 0
产品产地: Yeasen
品牌商标: Yeasen
更新时间: 2024-12-10T13:09:52
使用范围: null
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- 邮箱 : lizizhuan@yeasen.com
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产品信息
产品名称 |
货号 |
规格 |
价格(元) |
促销价(元) |
Annexin V-Alexa Fluor 488/PI Apoptosis Detection Kit Annexin V-Alexa Fluor 488/PI 细胞凋亡检测试剂盒 |
40305ES20 |
20 T |
518.00 |
386.00 |
40305ES50 |
50 T |
1120.00 |
786.00 |
|
40305ES60 |
100 T |
1960.00 |
1346.00 |
产品描述
Annexin V-Alexa Fluor488/PI细胞凋亡检测试剂盒(Annexin V-Alexa Fluor488/PI Apoptosis Detection Kit)是用Alexa Fluor488标记了的Annexin V作为探针,来检测细胞早期凋亡的发生,可用流式细胞仪或其他荧光检测设备进行检测。
其检测原理为:在正常的活细胞中,***脂酰丝氨酸(phosphotidylserine,PS)位于细胞膜的内侧,但在早期凋亡的细胞中,PS从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面,暴露在细胞外环境中。Annexin-Ⅴ(膜联蛋白-V)是一种分子量为35-36 KD的Ca2+依赖性***脂结合蛋白,能与PS高亲和力结合。可通过细胞外侧暴露的***脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。
另外,本试剂盒中还提供了***化丙***(Propidium Iodide,PI)用来区分存活的早期细胞和坏死或晚期凋亡细胞。PI是一种核酸染料,它不能透过正常细胞或早期凋亡细胞的完整的细胞膜,但可以透过凋亡晚期和坏死细胞的细胞膜而使细胞核染红。因此,将Annexin V与PI联合使用时,PI 则被排除在活细胞(Annexin V-/PI-)和早期凋亡细胞(Annexin V+/PI-)之外,而晚期凋亡细胞和坏死细胞同时被Alexa Fluor488 和PI 结合染色呈现双阳性(Annexin V+/PI+)。
产品组分
编号 |
组分 |
产品编号/规格 |
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40305ES20(20T) |
40305ES50(50T) |
40305ES60(100T) |
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40305-A |
100 μL |
250 μL |
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40305-B |
PI Staining Solution (20 μg/mL) |
200 μL |
500 μL |
1.0 mL |
40305-C |
1×Binding Buffer |
10 mL |
25 mL |
50 mL |
运输与保存方法
冰袋(wet ice)运输。-20 ℃避光长期保存,避免反复冻融,一年有效。
【注】:如果需要在短时间内多次重复使用,可以在4 ℃避光保存,半年有效。
注意事项
1)由于细胞凋亡是一个快速的过程,建议样品在染色后1小时之内进行分析。
2)对于贴壁细胞,消化是一个关键步骤。贴壁细胞诱导细胞凋亡时如有漂浮细胞,需收集漂浮细胞和贴壁细胞后合并染色。处理贴壁细胞时要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。胰酶消化时间过短,细胞需要用力吹打才能脱落,容易造成细胞膜的损伤,PI摄入过多;消化时间过长,细胞膜同样易造成损伤,甚至会影响细胞膜上***脂酰丝氨酸与Annexin V-Alexa Fluor488的结合。消化时将胰酶铺满孔板底后,轻摇时胰酶与细胞充分接触,然后倒掉大部分胰酶,利用剩余的少量胰酶再消化一段时间,待细胞间空隙增大,瓶底呈花斑状即可终止。在消化液中尽量不用EDTA,EDTA会影响Annexin V与PS的结合。
3)如果样品来源于血液,请务必除去血液中的血小板。因为血小板含有PS,能与Annexin V结合,从而干扰实验结果。可以使用含有EDTA的缓冲剂并在200 g离心洗去血小板。
4)试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
5)Annexin V-Alexa Fluor488和PI是光敏物质,在操作时请注意避光。
使用说明
1.1 样品染色
1. 悬浮细胞:300 g,4 ℃离心5 min收集细胞。
贴壁细胞:用不含EDTA的胰酶消化后,300 g,4 ℃离心5 min收集细胞。胰酶消化时间不宜过长,以防引起假阳性。
2. 配制1×Binding Buffer:用去离子水按1:4稀释4×Binding Buffer(4 mL 结合缓冲液+12 mL 去离子水)。
3. 用4 ℃预冷的PBS洗涤细胞2次,每次均需300 g,4 ℃离心5 min。
4. 加入250 μL 1×Binding Buffer重悬细胞,调节其浓度为1×106/mL。
5. 取100 μL细胞悬液于5 mL流式管中,加入5 μL Annexin V-Alexa Fluor 488和10 μL PI,轻轻混匀。
6. 避光、室温反应15 min。
7. 加入400 μL 1×Binding Buffer,混匀,样品在1小时内用流式细胞仪检测。
注:为了避免洗涤细胞时损失细胞,在吸液时可以用大的Tip头套上小的Tip头吸液。
1.2 流式细胞仪分析
Alexa Fluor488最大激发波长为488 nm,最大发射波长为519 nm;PI-DNA复合物的最大激发波长为535 nm,最大发射波长为615 nm。用CellQuest等软件进行分析,绘制双色散点图(two-color dot plot),Alexa Fluor488为横坐标,PI为纵坐标。每个样采集10,000 events。
1.3 荧光显微镜分析
1) 滴一滴用Annexin V-FITC/PI双染的细胞悬液于载玻片上,并用盖玻片盖上细胞。
2) 在荧光显微镜下用双色滤光片观察。Annexin V-FITC荧光信号呈绿色,PI荧光信号呈红色。
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产品编号 |
规格 |
价格(元) |
Annexin V-Alexa Fluor 488/PI Apoptosis Detection Kit Annexin V-Alexa Fluor 488/PI 细胞凋亡检测试剂盒 |
40305ES20 |
20 T |
518.00 |
40305ES50 |
50 T |
1120.00 |
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40305ES60
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