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百萤-Helixyte Green双链DNA定量检测试剂盒样品实验方案

作者:西安百萤生物科技有限公司 2023-11-13T00:00 (访问量:18822)

DNA定量是DNA样品制备过程中的一项重要工作,Helixyte 绿色双链DNA定量检测试剂盒提供了一种用Helixyte Green BR快速测定dsDNA的方法。该测定法在三个数量级上是线性的,并且比紫外线吸收度读数灵敏度高几个数量级。Helixyte Green-BR与dsDNA结合后荧光增强,序列依赖性小,可准确测定基因组DNA、病毒DNA、miniprep-DNA或PCR扩增产物等多种来源的DNA样品。该方法对RNA上的双链DNA(dsDNA)具有高度的选择性,并且被优化以测量从10 pg/ul到10 ng/ul的DNA浓度。

适用仪器

荧光酶标仪

Ex:490 nm 

Em:530 nm 

Cutoff:510 nm

推荐孔板:纯黑色孔板

实验方案

样品实验方案

简要概述

1. 准备dSDNA标准品,测试样品和染料工作溶液

2. 添加DNA标准液或测试样品(50 uL)

3. 添加Helixyte Green-BR工作溶液(50 uL)

4. 在室温下孵育2分钟

5. 检测Ex / Em = 490/530 nm的荧光强度

提示:操作前将所有组件加热到室温。暂时没有关于Helixyte Green dsDNA染色剂的致突变性或毒性的数据。由于该试剂与核酸结合,因此应将其视为潜在的诱变剂,应谨慎处理。DMSO储备溶液应特别小心,因为已知DMSO有助于有机分子进入组织。 

溶液配制

标准溶液配制

将100 uL的100 ug / mL dsDNA标准溶液(组分C)添加到400 uL的测定缓冲液(组分B)中,以生成20 ug / mL的dsDNA标准溶液。然后用测定缓冲液(组分B)进行1:3的系列稀释,以得到0至20 ug / mL的系列稀释的dsDNA标准品。

工作溶液配制

Helixyte Green BR工作溶液:将50 uL Helixyte Green BR(组分A)添加到5 mL的测定缓冲液(组分B)中,使总体积为5.050 mL。通过用箔纸覆盖或将其置于黑暗中来保护工作溶液免受光照。 注意:我们建议在塑料容器中而不是玻璃中制备该溶液,因为染料可能会吸附到玻璃表面。为了获得结果,应在准备后的几个小时内使用此溶液。

实验步骤

表1.  在透明底部96孔微孔板中的dsDNA标准品和测试样品的布局。DS = dsDNA标准品(DS1-DS7,20至0.027 ug / mL); BL =空白对照;TS =测试样品

BL

BL

TS

TS

DS1

DS1

DS2

DS2

DS3

DS3

 

 

DS4

DS4

 

 

DS5

DS5

 

 

DS6

DS6

 

 

DS7

DS7

 

 

表2.  每个孔的试剂组成

Well

Volume

Reagent

DS1-DS7

50 uL

连续稀释 (20 to 0.027 ug/mL)

BL

50 uL

缓冲液 (Component B)

TS

50 uL

实验样品

1. 根据表1和表2提供的布局,制备dsDNA标准品(DS)、空白对照品(BL)和测试样品(TS)。对于384孔板,每孔使用25 uL试剂,而不是50 uL。注:根据需要处理细胞或组织样本。

2. 添加50 uL Helixyte Green-BR染料工作液(2X)分别加入dsDNA标准液、空白对照液和供试品中,使总分析体积为100ul/孔。对于384孔板,添加25 uL的Helixyte Green-BR染料工作溶液,每孔总体积为50 uL/孔。

3. 在室温下避光培养2分钟。

4. 在Ex/Em=490/530 nm(截止=515nm)处用荧光酶标仪检测荧光强度。

 图示

图1.用Helixyte Green dsDNA定量试剂盒在96孔黑色孔板中测量了dsDNA剂量反应。 

 

 

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